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植物团体total RNA的提出取得

  

植物团体total RNA的提出取得

1. 先将研钵于-80℃冰箱中预冷,而后将1g样品在液氮中研磨成面子状。

2. 将面子倒入盛有3ml改变性别裂解液的50ml离心管中,充分匀浆。(1g样品参加3ml改变性别裂解液)。

3. 参加0.3ml(1/10大小)2M的NaAc(ph4-5)颠倒混匀。

4. 参加3ml(等大小)的水达到Z高限度酚,充分振动,再参加1ml(1/3)的氯仿,振动。

5. 冰浴10min。4℃,12000g离心10min

6. 谨慎转移上清于另一离心管中,参加2倍大小的无薄酒精,-70℃沉淀至少1钟头。

7. 4℃,12000g离心20min。

8. 去上清,取沉淀。加1ml 4M的LiCl 溶解沉淀(1mlLiCl/g团体),并转入1.5ml离心管中。

9. 4℃,13000rpm离心15min。

10.  用0.4ml DEPC水溶解沉淀,加1/2大小的水达到Z高限度酚,1/2大小的氯仿,颠倒混匀。

11.  4℃,13000rpm离心10min。

12.  取上清,加1/10大小的3MNaAc(ph5)和2倍大小的无薄酒精,-70℃沉淀30min以上。

13.  4℃,13000rpm离心15min。

14.  弃上清,用1ml 75%的酒精荡涤沉淀,4℃,13000rpm离心10min。

15.  弃上清,取沉淀,空气中干燥RNA沉淀,直到无酒精味。

16.  用40-60μl DEPC水溶解(300-500ug/g)RNA沉淀。

17.  取小量RNA用于标定OD值及电泳,剩下置-80℃冰箱中保留。
 
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